澳门新葡平台网址8883拥有超十年的蛋白表达经验，已成功交付2000+组蛋白，包括毒性蛋白、生长因子、酶等。主要应用于：作为抗原制备抗体；参与细胞实验与动物实验；测定蛋白酶活；研究蛋白相互作用（免疫共沉淀，GST pull down）；蛋白结晶结构研究，免疫组化实验等，不同的应用对于蛋白的要求也互不相同。在进行蛋白表达时，通常要考虑以下几点：
| 服务内容 | 服务内容 | 澳门新葡平台网址8883交付 | 价格 |
|---|---|---|---|
| 原核蛋白表达 | 蛋白表达 |
| 询价 |
| 内毒素去除服务 （可选） | 包括制备过程中内毒素控制及纯化过程中内毒素去除两部分，内毒素水平控制在0.01~1.0 EU/ug |
| |
| 大规模发酵服务 （可选） | 利用发酵工艺，提供毫克至克级重组蛋白制备，满足大量制备的需求 |
| 实验流程 | 服务特色 | 周期 |
|---|---|---|
| 密码子优化 | 自主研发MaxCodonTM生物信息学软件，对稀有密码子、密码子偏好性等因素进行分析优化（什么是密码子优化？） | ~2周 |
| 基因合成&载体构建 | 澳门新葡平台网址8883拥有几十种表达载体：pET系列（pET28a、pET30a、pET43.1 a等），pGEX4T-1、pBAD24、pGADT7、pQE-30等 | |
| 表达小试 | 根据蛋白的性质选择合适的菌株：BL21 (DE3) 、OrigamiB(DE3)、Rosetta(DE3)、BL21 CodonPlus(DE3）、codon Plus(DE3)、ESL等 多种表达条件优化，增加可溶性蛋白表达量 | 1周 |
| 放大表达&蛋白纯化 | 放大表达&纯化，交付您需要的蛋白量 四大蛋白纯化方法，先进的AKTA纯化设备，可纯化标签/无标签蛋白 | 2~3周 |
| 蛋白质检 | SDS-PAGE、WB检测、质谱检测（可选） |
案例为蛋白酶A的制备，该蛋白的制备难点在于：
a. 该蛋白酶自身含有酶切位点，表达很难获得目的蛋白，在前段加入一段非信号肽的前肽，可以抑制蛋白酶A的活性，再通过快速纯化获得；
b. 在纯化过程中需要对该段前肽进行切除，需要低温快速纯化，难度较大；
c. 切除后的蛋白不含有标签，不能用标签亲和纯化，需要利用磁珠对目的蛋白进行纯化。
蛋白表达：目的蛋白很难直接表达出来，通过在蛋白序列前段加入一段非信号肽的前肽，使目的蛋白成功表达；
蛋白纯化：采用胰凝乳蛋白酶对加入的前肽进行切除。实验人员对酶切条件进行了多次摸索，包括酶切的时间、胰凝乳蛋白酶浓度、是否需要加抑制剂、抑制剂浓度及抑制时间等（全程共用凝胶34块）。最终找到了合适的酶切条件成功将前肽切除掉。自制磁珠亲和纯化柱，验证可用后利用磁珠亲和纯化柱纯化得到目的蛋白。
Lane M：SDS-PAGE Protein marker
Lane 1：酶切前
Lane 2：酶切后不加抑制剂
Lane 3：酶切后+抑制剂（TPCK）
Lane 4：与NHS磁珠孵育后FT
Lane 5-6：洗杂
Lane 7-10：洗脱目标蛋白
原核表达系统是通过原核生物来获得外源蛋白的体系。原核表达是目前常用的重组蛋白表达方式之一，操作相对简便，要求较低。相对哺乳动物表达系统更加经济节约。但是也常常遇到一些问题，比如原核表达蛋白表达量低？蛋白不表达？蛋白表达不在上清易形成包涵体等情况，本文主要根据实验经验总结原核蛋白表达的两个问题蛋白为什么不表达和蛋白表达为什么不在上清，并提出针对性的解决方案，帮助我们提高实验的成功率。
大肠杆菌的表达部位通常在细胞质中，细胞周质中，细胞外。
周质中表达的蛋白质，分离纯化简单，而且周质中的氧化环境有利于蛋白质的正确折叠，但是蛋白产量很低
胞内表达是外源蛋白在大肠杆菌中主要的表达形式,但是由于大肠杆菌的细胞质环境呈现还原性，不利于蛋白二硫键的形成和稳定，从而导致蛋白的不准确折叠，形成不溶性的包涵体… 更多
更多原核表达系统内容
澳门新葡平台网址8883 澳门新葡平台网址8883(中国·进入网站)-Best website ©2023 All Rights Reserved
